ヒトACE2蛋白, SARS-CoV-2スパイク蛋白, ビオチン化SARS-CoV-2スパイク蛋白
SARS-CoV-2関係
バックグラウンド
アンジオテンシン変換酵素2（ Angiotensin-converting enzyme 2、ACE2）はACE ホモログとも呼ばれ、ACE とかなり相同性のある内在性膜タンパク質です。ACE2 は血圧調節に関与するレニン・アンジオテンシン系で働く因子の一つとして知られていましたが、最近になり、COVID-19 の原因である新型コロナウイルスがヒトの細胞に感染する際、細胞膜に存在するACE2 に結合してから細胞内に取り込まれることが明らかとなり、ACE2 は新型コロナウイルスの受容体でもあると考えられています。(1)ヒトACE2 蛋白・His タグ (HAK-ACE2_UL-1) を96穴プレートに固相し、ウイルス蛋白の受容体結合ドメインをウサギFc と結合させた融合蛋白であるSARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ（HAK-SPD_UL-1）またはビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ（HAK-SPD_bio-1）を加え、HRP 標識した2 次抗体やストレプトアビジンで検出させることで、高感度なバインディング・アッセイを提供します。
SARS-CoV-2 スパイク蛋白とACE2 との結合実験プロトコール
ヒトACE2蛋白・Hisタグ(100µg)
製品情報
１．タンパク質構造
ヒトACE2 蛋白・His タグ (HAK-ACE2_UL-1) は、ヒト・アンジオテンシン変換酵素2 の細胞外領域に相当するSer19-Pro738 のC 末端にポリヒスチジンタグを付けてHEK293 細胞で発現させ、Ni カラムを用いて精製したものが含まれています。
２．純度
＞95％（SDS-PAGE）
３．組成
ヒトACE2 蛋白・His タグ 1mg/mL、0.1MPBS(pH7.2~7.4)
４．保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。
製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
５．SDS-PAGE
本製品430ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、CBB 染色した。（図1）
ヒトACE2 蛋白・His タグ (HAK-ACE2_UL-1) は、ヒト・アンジオテンシン変換酵素2 の細胞外領域に相当するSer19-Pro738 のC 末端にポリヒスチジンタグを付けてHEK293 細胞で発現させ、Ni カラムを用いて精製したものが含まれています。
２．純度
＞95％（SDS-PAGE）
３．組成
ヒトACE2 蛋白・His タグ 1mg/mL、0.1MPBS(pH7.2~7.4)
４．保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。
製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
５．SDS-PAGE
本製品430ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、CBB 染色した。（図1）
図１ SDS-PAGE
使用例
１．バインディング・アッセイ固相化した0.156-10μg/mL のヒトACE2蛋白・His タグ(100μL/ウェル)に0.8μg/mLのビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識ストレプトアビジンで検出した。
この際の検量線において、線形範囲（リニアレンジ）は0.156-1.25μg/mL であった。（図２）
２．競合法による結合阻害物質スクリーニング
固相化した1μg/mL のヒトACE2 蛋白・His タグ(100μL/ウェル)と600ng/mL のビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグの結合反応に10-5000ng/mLの結合阻害物質（SARS-CoV-スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ）を添加し、HRP 標識ストレプトアビジンで検出した。
この際の50％阻害濃度(IC50)は140ng/mL(2.7nM)であった。（図３）
図2 バインディング・アッセイ
図3 競合法によるインヒビション・アッセイ
SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ (100μg)
(SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Receptor-binding domain、Rabbit IgG1 Fc tag, HAK-SPD_UL-1)製品情報
１．タンパク質構造 SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ(HAK-SPD_UL-1) は、SARS-CoV-2Spike glycoprotein Receptor-bindingdomain のArg319-Phe541のC 末端にウサギIgG1 Fc タグ及びHisタグを付けてHEK293 細胞で発現させ、プロテインA カラム を用いて精製したものが含まれています。２．純度
＞95％（SDS-PAGE）
３．組成
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ 1mg/mL, 0.1M-PBS(pH7.2~7.4)
４．保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。
製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
５．SDS-PAGE
本製品500ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、CBB 染色した。（図4）
図4 SDS-PAGE
使用例
１．バインディング・アッセイ固相化した1μg/mL のヒトACE2 蛋白・His タグ(100μL/ ウェル) に0.293-1200
ng/mL のSARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識
ウサギIgG 抗体で検出した。この際の検量線において、線形範囲（リニアレンジ）
は0.293-18.8ng/mL であった。(図５）
図5 バインディング・アッセイ
ビオチン化SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ (20μg)
(Biotin labeled SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Receptor-binding domain、Rabbit IgG1 Fc tag, HAK-SPD_Bio-1)製品情報
１．タンパク質構造ビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(HAK-SPD_bio-1)は、SARS-CoV-2 Spike glycoproteinReceptor-binding domain のArg319-Phe541のC 末端にウサギIgG1 Fcタグ及びHisタグを付けてHEK293 細胞で発現させ、プロテインA カラムを用いて精製し、ビオチン化したものが含まれています。
２．純度
＞95％（SDS-PAGE）
３．組成
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ 1mg/mL, 0.1M-PBS(pH7.2~7.4)
４．保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。
製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
５．SDS-PAGE
ビオチン化前の本製品500ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、CBB 染色した。（図6）
図6 SDS-PAGE
使用例
１．バインディング・アッセイ固相化した1μg/mL のヒトACE2 蛋白(100μL/ウェル)に29-21000ng/mL のビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識ストレプトアビジンで検出した。この際の検量線において、線形範囲（ リニアレンジ） は29-798ng/mL であった。(図７）
図7 バインディング・アッセイ
参考文献
（１）Alexandra C. Walls, Young-JunPark, et al., Cell 180, 1-12 (2020)希望小売価格
| 品名 | 品番 | 包装 | 貯法 | 希望小売価格(税別） |
|---|---|---|---|---|
| ヒトACE2 蛋白・His タグ（100µg） Human ACE2, His Tag (100µg) データシート |
HAK-ACE2_UL-1 | 100µg | -70℃以下 | ￥80,000 |
| SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ (100μg) SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Receptorbinding domain, Rabbit IgG1 Fc Tag (100μg) データシート |
HAK-SPD_UL-1 | 100µg | -70℃以下 | ￥80,000 |
| ビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ (20μg) Biotin labeled SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Receptor-binding domain, Rabbit IgG1 Fc Tag (20μg) データシート |
HAK-SPD_bio-1 | 20µg | -70℃以下 | ￥20,000 |
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